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Chemicall根癌(熱激)感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:EHA101 Chemically Competent Cell/ Chemicall根癌(熱激)感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:EHA101
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:492

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABN509-100
規(guī)格100支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

EHA101 Chemically Competent Cell  根癌(熱激)感受態(tài)細(xì)胞

基因型:

C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR)Nopaline

簡要說明:

EHA101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——li福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101(pTiBo542DT-DNA) 型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:strep、kan,賦予EHA101菌株lian霉素抗性和ka那霉素抗性,適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)104 cfu/μg DNA

操作說明:

1.取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加1ug(體積不大于10ul)質(zhì)粒DNA,用手bo打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3.加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4.6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當(dāng)平板只含有50ug/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。

注意事項(xiàng):

1.加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10 ;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2.混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.LI福平濃度不應(yīng)高于25ug/ul,過高的LI福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50ug/ml kan,若所用平板含有20ug/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。

5.培養(yǎng)基中加入LI福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入LIAN霉素或QING大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但LIAN霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮LIAN霉素或QING大霉素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。












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