基因型

MATα ura3-52 leu2 trk1Δhis3Δ200 his4-15trk2Δ1::pCK64

簡(jiǎn)單說(shuō)明：

1、R5421釀酒酵母菌株為K+/鉀離子缺陷型菌株，在文獻(xiàn)中也稱為CY162，MATα型，多用于K+/鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的鑒定試驗(yàn)中，也可用于K+/鉀離子通道或鈉鉀離子泵的鑒定試驗(yàn)。Transformation marker為：ura3，leu2，該菌株可以在含有100mM KCl的培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，在含有5-10mMKCl的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，當(dāng)培養(yǎng)基中KCl濃度低于0.5mM，R5421（CY162）細(xì)胞停止生長(zhǎng)。R5421感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說(shuō)明

1、取一支無(wú)菌的1.5ml EP管，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復(fù)一次)，100µl冰上融化的感受態(tài)細(xì)胞，PEG/LiAc 500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做）4. 42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；5. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復(fù)蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）6. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)48-96h。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫下溶解后使用。